無(wú)機(jī)焦磷酸酶ELISA 檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

貨號(hào)：HG-IP001

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

無(wú)機(jī)焦磷酸酶(Inorganix Pyrophosphatase,PPase)能夠催化一分子焦磷酸鹽轉(zhuǎn)化為兩分子磷酸鹽離子。PPase 能夠避免核酸擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)中因無(wú)機(jī)焦磷酸的累積而抑制反應(yīng)體系。在 mRNA 疫苗制品的生產(chǎn)中會(huì)通過(guò)添加 PPase 來(lái)提高產(chǎn)量。因此，對(duì)mRNA 疫苗制品需要進(jìn)行 PPase 殘留量的檢測(cè)。
本試劑盒采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫檢測(cè)(ELISA)法，將 PPase 標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本加入預(yù)包被抗 PPase 抗體的酶標(biāo)板，然后加入稀釋后的生物i素標(biāo)記的 PPase 檢測(cè)抗體，最后加入 Streptavidin-HRP，形成抗體+抗原+抗體-Biotin+SA-HRP 復(fù)合物，洗板后加入 TMB 顯色液顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下由無(wú)色轉(zhuǎn)化成藍(lán)色并在終止液的作用下最終轉(zhuǎn)化成黃色。黃色的深淺與樣本中被檢測(cè)到的 PPase 的量呈正相關(guān)。

檢測(cè)范圍: 0.25~16 ng/mL

定量限:0.25 ng/mL

規(guī)格：

96T

應(yīng)用：

適用于生物制品純化工藝過(guò)程的優(yōu)化、中間工藝過(guò)程的雜質(zhì)控制以及終產(chǎn)品的放行檢測(cè)。

試劑盒組成：

備 注:所有組分存儲(chǔ)溫度均為 2~8℃，有效期12個(gè)月。

需自行準(zhǔn)備的材料

◆酶標(biāo)儀

◆去離子水

◆恒溫培養(yǎng)箱

◆全新濾紙

◆微量移液器及吸頭

◆渦旋振蕩器

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1.所有試劑以及待測(cè)樣本需要恢復(fù)室溫。所有試劑現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.1x洗液配制:濃縮洗液平衡至室溫(18~25°C)，不要有結(jié)晶?；靹蚝蟾鶕?jù)用量，取適量用超純水按 1:19 的比例，將20x洗液稀釋 20 倍，最終得到1x洗液。

3.1x 檢測(cè)抗體配制:100x檢測(cè)抗體充分溶解后，離心，取適量然后用稀釋液2以1:99 的比例進(jìn)行稀釋。
4.1x酶結(jié)合物配制:500x酶結(jié)合物充分溶解后，離心，取適量然后用稀釋液2以1:499 的比例進(jìn)行稀釋。
5.標(biāo)準(zhǔn)品的制備：

準(zhǔn)備8個(gè) 1.5mL 離心管，按照標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次標(biāo)記。取一支凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入 1mL稀釋液 1，徹i底溶解后靜置 10 分鐘，所得溶液濃度為 64ng/mL。第一個(gè)離心管中加入 450μL 稀釋液 1，其余各離心管分別加入 300uL 稀釋液 1，先取 150uL 溶解混勻的 64ng/mL 標(biāo)準(zhǔn)品加入到第一個(gè)離心管中充分混勻后即為 16ng/mL，再依次按下圖進(jìn)行梯度稀釋:

操作步驟

使用前所有試劑組分以及待測(cè)樣本需要恢復(fù)室溫。建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品和待檢樣本進(jìn)行雙復(fù)孔測(cè)定。

1.試劑準(zhǔn)備:提前準(zhǔn)備好各種待測(cè)試劑、稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本。

2.酶標(biāo)板條確定:計(jì)算待測(cè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品所需酶標(biāo)板條，將酶標(biāo)條從鋁箔袋取出，剩余的酶標(biāo)條放回鋁箔袋中并封好袋口，低溫保存。

3.浸泡酶標(biāo)板:加入 1xWash Buffer(300 μL/孔)浸泡酶標(biāo)板，靜置 30 秒后棄去孔中液體，拍干酶標(biāo)板。洗板對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有重要影響，確保最后一次拍板沒(méi)有洗液殘留。

4.樣本孵育:加入標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本，100 μL/孔，確保 15 min 內(nèi)完成點(diǎn)樣，37℃靜置孵育1h。

5.洗板:棄去孔中液體，加入1xWash Buffer(300uL/孔)洗板五次，拍干酶標(biāo)板。

6.檢測(cè)抗體孵育:將 1x 檢測(cè)抗體加入酶標(biāo)板中，100 uL/孔，37℃靜置孵育1h。

7.洗板:棄去孔中液體，加入1xWash Buffer(300 uL/孔)洗板五次，拍干酶標(biāo)板。

8.酶結(jié)合物孵育:將 1x 酶結(jié)合物加入酶標(biāo)板中，100 μL/孔，37℃靜置孵育 40 min。

9.洗板:棄去孔中液體，加入1xWash Buffer(300 uL/孔)洗板五次，拍干酶標(biāo)板。
10.顯色:使用前的10 min 將底物液恢復(fù)至室溫(18~25°℃)，將底物液TMB加入酶標(biāo)板中，100 uL/孔，37℃避光孵育 15

mine

11.終止:加入 50 uL/孔終止液至酶標(biāo)板中，輕輕震動(dòng)酶標(biāo)板至顯色均勻。

12.讀值:20 min 內(nèi)讀取 450nm/630nm 波長(zhǎng)處的吸光度值。450nm 作為檢測(cè)波長(zhǎng)，630nm 作為參比波長(zhǎng)。

結(jié)果處理

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線OD處理（見(jiàn)下例，僅為示例，具體以實(shí)際測(cè)定為準(zhǔn)）

2. 標(biāo)準(zhǔn)品理論濃度與對(duì)應(yīng) OD 值以四參數(shù)進(jìn)行擬合，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線(如下圖所示)。

注意事項(xiàng)

1.樣品首i次檢測(cè)，建議進(jìn)行至少3個(gè)連續(xù)倍數(shù)的稀釋?zhuān)栽跇?biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)產(chǎn)生至少一個(gè)稀釋后樣品。

2.試劑按標(biāo)簽說(shuō)明儲(chǔ)存，使用前室溫(18~25℃℃)平衡。3.包被酶標(biāo)板使用前，請(qǐng)平衡至室溫(18~25°C)再打開(kāi)外包裝袋，實(shí)驗(yàn)中不用的板條立即放回包裝中密封，4℃可保存一個(gè)月。其余不用試劑應(yīng)包裝好或蓋好。

4.實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。

5.使用前檢查試劑盒內(nèi)各種試劑。試劑稀釋、加樣和終止反應(yīng)應(yīng)充分混勻或搖勻?qū)?shí)驗(yàn)結(jié)果尤為重要。

6.洗滌過(guò)程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在潔凈的紙中上充分拍干，直至看不到水印。勿將紙巾直接放入反應(yīng)孔中吸水。

7.底物顯色液對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下，避免與金屬接觸影響結(jié)果。

8.本產(chǎn)品為一次性使用的試劑盒，請(qǐng)?jiān)谛趦?nèi)使用。

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